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Separación de fragmentos de ADN: electroforesis en gel


Como vimos en el ítem anterior, los fragmentos de ADN formados con la acción de enzimas de restricción tienen diferentes tamaños. La técnica más utilizada para separar fragmentos de ADN es la electroforesis a través de geles de agarosa.

La agarosa es un polisacárido (como el agar y la pectina) que se disuelve en agua hirviendo y luego se gelifica cuando se enfría como la gelatina. Para realizar una electroforesis, se prepara un gel de agarosa, se introduce ADN en pequeños pozos de gel y luego se aplica una corriente eléctrica a través del gel. Como el El ADN está cargado negativamente, es atraído por el electrodo positivo. Sin embargo, para alcanzar el electrodo positivo, el ADN debe migrar a través del gel de agarosa.

Los fragmentos de ADN más pequeños pueden migrar a través de un gel de agarosa más rápido que los fragmentos de ADN más grandes. La tasa de migración de fragmentos de ADN lineales a través de agarosa es inversamente proporcional al log10 de sus pesos moleculares.

Puede calcular el tamaño exacto de un fragmento determinado en función de su relación de migración. Después de la electroforesis en gel, los fragmentos de ADN generalmente se tiñen con bromuro de etidio, que tiene afinidad por el ADN y fluoresce (se hace visible) vívidamente en contacto con la luz ultravioleta. De esta manera puede ubicar las bandas que corresponden al ADN. Los fragmentos de ADN pueden aislarse y purificarse a partir de geles de agarosa.

¿Y ahora? ¿Qué haces con estos fragmentos de ADN?